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實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?/strong>通過對(duì)裸鼠腫瘤組織樣品的前處理研磨破碎,提取樣品中的蛋白;再驗(yàn)證通過外泌體干預(yù)的荷瘤鼠模型中,腫瘤的基因表達(dá)情況是否與蛋白測序結(jié)果一致。
實(shí)驗(yàn)設(shè)備:冷凍組織研磨儀 JXFSTPRP-CLN-48
裸鼠腫瘤組織樣品的前處理研磨實(shí)驗(yàn)操作過程:
1.將小鼠通過注射麻醉劑慢慢失去知覺后,對(duì)小鼠進(jìn)行解剖取小鼠身上的腫瘤塊。
2.取下腫瘤塊后在將腫瘤塊剪切成綠豆大小的塊狀,可先放入液氮或者-80℃的冰箱中方便后期研磨。
3.冷凍研磨儀開機(jī),先將儀器制冷功能打開,溫度設(shè)置成-20℃,保證樣品在研磨時(shí)蛋白不會(huì)發(fā)生裂解。
4.研磨儀預(yù)設(shè)溫度達(dá)到后,將剛剛?cè)『眉羟泻蟮臉悠贩湃胙心ス苤?,每個(gè)研磨管盡量放100mg左右,再往研磨管中加入4顆研磨珠,再加入蛋白提取液蓋上研磨管蓋,進(jìn)行濕磨。將研磨管放入適配器中,適配器再固定到研磨儀上。
5.設(shè)置研磨儀參數(shù),設(shè)置好研磨頻率和時(shí)間,研磨次數(shù)2次,研磨中斷時(shí)間15s,經(jīng)過研磨后,再進(jìn)行蛋白的提取。
實(shí)驗(yàn)前處理研磨操作注意事項(xiàng):
1、研磨管放到適配器上,一定要注意研磨管的平面配平,否則會(huì)損壞研磨儀的寶塔。
2、適配器在放到研磨儀寶塔上時(shí),固定螺母一定要固定緊,否則既會(huì)損壞研磨儀寶塔,還會(huì)對(duì)適配器底部造成損壞。
裸鼠腫瘤組織樣品的前處理研磨實(shí)驗(yàn)前后效果圖:
實(shí)驗(yàn)結(jié)果:裸鼠腫瘤組織樣品在經(jīng)過冷凍組織研磨儀儀的前處理研磨實(shí)驗(yàn)應(yīng)用后,其對(duì)裸鼠腫瘤組織樣品提取的蛋白含量充足;且低溫冷凍的實(shí)驗(yàn)環(huán)境也為蛋白質(zhì)活性的保留、核酸降解的抑制得到的有效解決。
冷凍組織研磨儀能在非常短的時(shí)間內(nèi)將土壤、植物和動(dòng)物的組織,器官等樣品完成研磨、粉碎。隨著近代醫(yī)學(xué)的發(fā)展,特別是腫瘤學(xué)和免疫學(xué)的需要,動(dòng)物組織的研磨已經(jīng)成為了實(shí)驗(yàn)室不可少的一個(gè)環(huán)節(jié)。JXFSTPRP-CLN-48低溫研磨樣品,實(shí)現(xiàn)無交叉污染的同時(shí),低溫研磨樣品能夠有效抑制核酸降解、保留蛋白質(zhì)活性。是實(shí)驗(yàn)室樣品前處理的好幫手。